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SDS--聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶实验原理及实验基本原理
发布时间:2022-10-05 15:07:07 浏览 191次 巩义市维纳净水材料有限公司

SDS--聚丙烯酰胺凝胶电泳 一、实验目的 掌握垂直板电泳的操作方法。2、实验原理聚丙烯酰胺凝胶(PAG)是由单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂亚甲基双丙烯酰胺(Bis)在催化剂四甲基乙二胺()和引发剂过硫酸中聚合而成的具有三维网络结构的凝胶,在铵(AP)的作用下交联。使用这种凝胶作为支持介质的电泳称为 PAGE。PAGE具有电泳和分子筛的双重功能。PAGE分为两类:连续系统和不连续系统。不连续体系具有电荷效应、分子筛效应和浓缩效应。蛋白质分子与 SDS 阴离子结合后聚丙烯酰胺凝胶电泳缓冲液,负电荷量远远超过其原始净电荷,从而消除了不同蛋白质之间的净电荷差异。. 蛋白质的电泳迁移率主要由亚基的相对分子质量决定。无论其电荷的性质如何。三、操作步骤 试剂(ml) 10% 分离胶 5% 浓缩胶 ddH5.5 30% 储备胶 1.31.-HCl3.-% SDS0.150.% AP0.150.08(使用前添加)总体积 15 电泳:在电泳中在槽中加入1个电泳缓冲液非离子聚丙烯酰胺,接上电源,负极在上,正极在下。电泳时浓缩胶电压为80V,分离胶电压为150V。染色:取出胶水,用考马斯亮蓝染色液染色20-。脱色:将其放入脱色液中聚丙烯酰胺凝胶电泳缓冲液,脱色数次,直至蛋白条带清晰。凝胶 4. 实验结果 5. 注意事项 为了达到更好的凝胶聚合效果,缓冲液的 pH 值要准确,10% AP 应在一周内使用。当室温较低时,或AP用量可加倍。未聚合的丙烯酰胺和亚甲基双丙烯酰胺具有神经毒性,可通过皮肤和呼吸道吸收,应采取预防措施。用琼脂封口和倒胶时应无气泡,以免影响电泳时电流的通过。浓度效应——样品浓度效应 电荷效应 分子筛效应 堆积凝胶缓冲液 Tris-Cl,pH6.7 分离凝胶缓冲液 Tris-Cl,pH8。

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