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【知识点】测序凝胶加样的基本原理及应用介绍
发布时间:2022-10-06 10:29:44 浏览 170次 巩义市维纳净水材料有限公司

2. 测序凝胶上样缓冲液 98% 去离子甲酰胺/(pH8.0) 0.025% 二甲苯氰 FF0.025% 溴酚蓝待处理。但甲酰胺和混床树脂一旦变为微黄色,应在磁力搅拌器上一起搅拌1小时进行去离子处理,过滤两次,编号为-70。3、常用电泳缓冲液说明: TBE溶液存放时间长了会形成沉淀。为避免此问题,可将 5 溶液在室温下储存在玻璃瓶中,并在发生沉淀后丢弃。在载玻片上进行琼脂糖凝胶电泳,工作溶液为 1TBE(即浓缩原液的 1:5 稀释液)。但是阳离子聚丙烯酰胺,0.5 的工作溶液具有足够的缓冲能力。现在,几乎所有的琼脂糖凝胶电泳都使用 1:10 稀释的储备溶液作为工作溶液。聚丙烯酰胺gel立式槽的缓冲槽较小,因此通过缓冲液的电流量通常较大,需要1TBE才能提供足够的缓冲能力。碱性电泳缓冲液应立即使用。在 Tris-甘氨酸缓冲液中进行 SDS聚丙烯酰胺 凝胶电泳。4. 2SDS 凝胶上样缓冲液/(6.8)/L 二硫苏糖醇 (DTT) 4% SDS(电泳级) 0.2% 溴酚蓝 20% 甘油 2SDS 上样缓冲液可使用不含 DTT 室温保存,1mol/L 原液应在使用前立即添加到上述缓冲液中。5. Gel 使用上述凝胶上样缓冲液的目的有三:增加样品的密度;确保DNA均匀进入样品孔;以可预测的速率迁移到阳极的染料。无论琼脂糖浓度如何,溴酚蓝在琼脂糖中的移动速率约为二甲苯青 FF 的 2.2 倍。当电泳液为0.5TBF时,溴酚蓝在琼脂糖中的迁移率与长双链线性DNA大致相同,而二甲苯蓝FF与长4kb线性DNA的迁移率相同。在琼脂糖浓度从 0.5% 到 1.4% 的范围内,凝胶浓度的变化不会显着影响这些对应关系。选择使用哪种上样染料取决于个人喜好。然而聚丙烯酰胺凝胶电泳缓冲液,溴甲酚绿应该用作碱性凝胶的示踪染料聚丙烯酰胺凝胶电泳缓冲液,因为它在碱性 pH 值下比溴酚蓝更鲜艳。

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